用于分析的藥用cannabis植物樣品的制備
(THC)和(CBD)的制備
使用植物基因組學(xué)微孔板
隨著(zhù)用于醫藥和研究目的的cannabis合法化程度的提高,對其有效成分的準確和高通量分析的需求急劇增加。重要的兩個(gè)是影響神經(jīng)活動(dòng)的 THC 和具有治療作用的鎮痛 CBD。
THC 和 CBD 的比例對于區分藥用cannabis和休閑cannabis至關(guān)重要。這個(gè)比例對稅務(wù)機關(guān),醫療監管機構和種植者都很重要。
THC / CBD 比率的測定
準確測定 THC / CBD 比率是通過(guò)cannabis的葉、芽和花樣品的有效樣品制備來(lái)確定的。 傳統的樣品制備方法, 使用珠磨或研磨機來(lái)均化這些材料。 當在聚丙烯微孔板中進(jìn)行時(shí),這些機器施加的極-大的力通常會(huì )導致板損壞,導致開(kāi)裂,泄漏并終導致交叉污染。
出于分析的目的,期望確定總 THC含量。這將包括無(wú)羧酸鹽形式(THCA)以及熱轉化形式-THC。 醫學(xué)價(jià)值是 CBD 含量,其再次必須總計包括天然羧酸形式。 液相色譜(HPLC)可以在轉化為相應的游離形式的 THC 和 CBD 之前鑒定 THCA 和 CBD的酸組分,因此通常優(yōu)選用于口服酊劑和cannabis產(chǎn)品。 氣相色譜(GC)分析的缺點(diǎn)是熱噴射器中 THCA 和TBDA 的破壞可能使得 THC / TBD 比率的終確定不準確。
因此,HPLC / UV 或 LC / MS 應該是優(yōu)先選的分析方法。 以下方法也可用于制劑和原料植物材料。
所需設備耗材:
• 2ml 96 孔研磨板 219030
• 研 96 孔磨板蓋墊 219004
• 真空歧管 228008
• 蛋白質(zhì)沉淀板 240100
• Porvair Sciences Minivap 96 孔螺旋針頭氮吹儀 (229206 & 229072)
• Porvair Sciences 混勻儀配 3 個(gè)適配器 (229651 & 229654)
• Porvair Sciences 2.2ml 96 孔深孔板 (219009)
• 研磨設備
制備方法:
- 對于 THC / CBD 比率分析,應隨機抽取cannabis葉、芽和花的樣本(如果有的話(huà))。我們建議在 Porvair 229030
- 植物基因組學(xué)板(研磨板)的每個(gè)孔中準確稱(chēng)量約 50mg 干燥的植物材料。
- 在 229030 研磨板上添加 3 x 3mm 鋼或鎳研磨球(如果研磨種子材料需要鎳)。
- 219004 蓋墊蓋住蓋板,將蓋好的蓋板放入研磨設備中。
- 以 1500 轉/分鐘研磨 2 分鐘。取下蓋墊,將干燥的研磨粉(通過(guò) 1 毫米篩)轉移到 Porvair P3 過(guò)濾
- 器微孔板(240100)的每個(gè)孔中。
- 準確添加 400ul 甲醇或異丙醇(根據需要)以溶解植物材料中的油性殘余物。
- 在配有 P3 板適配器(229654)的 Porvair Microshake 混勻儀(229651)上以 330 rpm 混勻 10 分鐘。
- P3 沉淀板中的超疏水玻璃料可以防止泄漏,但為了更加安心,可以使用可選的排水蓋墊,如果需要,
- 應在測定開(kāi)始前將其安裝在板的下側(219005)。
- 搖動(dòng)后,取下排水蓋,將 P3 板放在 Porvair Microlute 上歧管(228008),在增壓室中有 2ml 收集板。這個(gè)收集板可以是另一種子基因組學(xué)板(219030)或標準的 2ml 方孔板(219009)。
- 任何 SLAS / ANSI 格式深孔板都可用于收集步驟,但是 219009 和 219030 使用不含可萃取物的聚丙烯,它不會(huì )產(chǎn)生瀝濾液。要分析的解決方案。此外,它們的板幾何形狀經(jīng)過(guò)優(yōu)化 Porvair Microlute Manifold 使得無(wú)需進(jìn)一步調整以防止孔間交叉污染。施加真空以將純化的提取物向下吸過(guò)過(guò)濾器并進(jìn)入孔中收集板。
- 使用歧管上的閥門(mén)隔離真空供應,并使用針閥釋放增壓室中的真空?,F在可以丟棄過(guò)濾板,并且可以將含有有機提取物的收集板帶到 HPLC 進(jìn)行分析。
- 如果優(yōu)選分析總 THC 和 CBD,則需要額外的步驟。在這種情況下,THCA 和 CBDA 必須使用熱蒸發(fā)設備轉化為 THC 和 CBD。
- 取 2ml 含有溶劑提取物的收集板,將其放在 Porvair Minivap 氮吹儀上。 ? 將溫度設定為高(60℃)并蒸發(fā)至干燥,繼續用熱氣加熱 45 分鐘,以使不穩定的 THCA 和 CBDA 解離為 THC 和 CBD。
- 冷卻至室溫后,重新懸浮于 400μl 溶劑中,在 Microshake 混勻儀上攪拌以確保良好混合,然后如前所述進(jìn)行 HPLC 分析。